Utveckling och utvärdering av ett fidelitetssystem för DNA polymeraser

Sammanfattning: En publicerad metod för undersökning av noggrannhet hos DNA polymeraser har undersökts. Metoden bygger på in vitro replikation av lacZα genen i pUC18 och identifiering av mutationer genom blå vit selektion efter transformation av reaktionsprodukten. I arbetet visas att framställning av templatet till polymerasreaktionen kan göras enligt beskrivning, men att utbytet blev lågt. Polymerasreaktionen med det framställda templatet fungerade även det enligt beskrivning men mängden erhållen produkt var för liten för att ge kolonier efter transformationssteget. Innan metoden kan användas behövs tillgång till större mängder templat för polymerasreaktionen. En möjlighet att förbättra utbytet är en bättre procedur för extraktion av det önskade fragmentet ur agarosgel.