UNDERSÖKNING AV FLUOROKINOLONRESISTENS HOS MYCOPLASMA GENITALIUM

Sammanfattning: Mycoplasma genitalium är en intracellulär bakterie som är sexuellt överförbar. Hos kvinnor orsakar M.genitalium bland annat uretrit och cervicit och hos män främst non-gonococcal uretritis, NGU. Förstahandsval för behandling av M.genitalium är av makrolider, exempelvis azithromycin. Andrahandsvals- behandlingen är fluorokinoloner. Denna studie gick ut på att beskriva mutationer i ”quinolone resistance determining region (QRDR) i Topisomerase IV (parC genen) och i DNA gyras subunit A (gyrA genen) hos M. genitalium-positiva, som även bär på makrolid-resistens i kliniska prover inom Region Skåne. Metoden som användes var en konventionell PCR för amplifiering av parC och gyrA gen i patientproverna som sedan undersöktes via DNA-sekvensering. Vidare utfördes en optimeringsanalys på olika parametrar (primerkoncentration, annealingtemperatur och antal cykler) för konventionell PCR för att uppnå bra sekvenseringsresultat. Ett fisher´s exact test med GraphPad QuickCalcs gjordes också för att se hur frekvent mutationer kopplad till fluorokinoloner för respektive gen är i denna studie jämfört med mutationer i en utvald studie från Melbourne, Australien. Vid sekvenseringsanalys hittades mutationer i både parC (C234T, G248T, G259A, G259T) och gyrA (G295A). 0,2 µM primerkoncentration till PCR-mix inför PCR, 58º C annealingtemperatur och 50 cykler ansågs lämpligast vid optimeringsanalys. Resultatet från GraphPad QuickCalcs visade ingen skillnad mellan studierna i hur frekvent mutationer förekommer och är statistiskt signifikant vid signifikansnivå 0,05 med two-tailed test för båda gener. Det centrala syftet i att beskriva mutationer i QRDR-regionen ämnar ge kunskaper om mutationer kopplade till fluorokinolonresistens hos M.genitalium isolat.