HIGH DILUTION SEQUENCE SPECIFIC MOLECULARLY IMPRINTED POLYMERS TARGETING PHOSPHORYLATION ON ZAP70

Sammanfattning: B-cell kronisk lymfatisk leukemis (B-KLL) sjukdomsförlopp är i stor utsträckning heterogen, många patienter kan leva i flera år utan någon behandling medan andra snabbt insjuknar. Prognostiska faktorer som identifierar de som behöver behandling kort efter diagnos har ett stort kliniskt värde. Zeta-kedje-associerat proteinkinas 70 kDa (ZAP70), normalt uttryckt i T-celler har nyligen setts uttryckas av B-celler i B-KLL och det ses även en korrelation mellan fosforylering av ZAP70 i dessa patienter och dålig prognos. Analysering av fosfopeptider är en utmanande uppgift och den låga mängden av proteinerna kan kräva anrikning före analys med masspectrometri. Begränsningar i nuvarande anriktningstekniker har lett till att forskare letar efter alternativa metoder för berikning av fosfopeptider. Arbetet som presenteras i denna avhandling fokuserar på utveckling och karaktärisering av fospeptidanrikning med molekylärt präglade polymerer (MIP) specifika mot fosforylerad tyrosin. Syntetiserade under höga utspädnings förhållande, med användning av Fmoc-tyrosin-fosfotyrosin-etylester eller Fmoc-tyrosin-tyrosin-etylester med en urea- baserad funktionell monomer. Bindning av polymererna jämfördes under olika betingelser och utvärderades med HPLC (High Performance Liquid Chromatography) och Matrix-Assisted Laser Desorption / Ionization Time-of-Flight (MALDI-TOF). MIPs som erhölls i denna avhandling hade jämförbar bindnings prestanda mot den traditionella MIP-syntesen och visade selektivitet för fosfotyrosin och fosfoserin. Vidare när MIPs jämfördes med icke-imprintade polymererna (NIP) sågs det en signifikant mindre bindnings förmåga till de fosforylerade peptider i karbonatbuffert pH 7,4.