Immunohistokemisk färgning av SATB2 för detektion av kolorektalcancer

Sammanfattning: Kolorektalcancer (CRC) är en av de vanligaste förekommande cancerformerna i världen och är även den näst dödligaste typen. Vid immunohistokemiska (IHC) analyser använder man sig av markörer som cytokeratin 20 (CK20) och caudal-typ homeobox 2 (CDX2) för diagnostisering av CRC. En ytterligare markör som kan användas är special AT-rikt sekvensbindningsprotein 2 (SATB2). SATB2 är ett DNA-bindande protein som finns mellan 70-97% hos CRC-fall. Ett automatiserat färgningsinstrument, BenchMark Ultra använder IHC, där analysprincipen går ut på att den inmärkta sekundära antikroppen med pepparrotsperoxidas (HRP) binder till den primära antikroppen och dess antigen. I närvaro av 3’3-diaminobenzindine (DAB) bildas en brun färgprodukt tillsammans med väteperoxidaset (H2O2) i HRP. Syftet med arbetet var att framställa ett färgningsprotokoll för SATB2 och se hur detta protokoll fungerar vid riktiga patientfall. Två klossar med två tarmvävnader på varje och en testkontroll snittades, färgades med BenchMark Ultra och monterades för mikroskopi. Samma procedur utfördes med patientfallen. Resultatet visade att preparaten med SATB2-antikroppsspädningen 1:200 fungerade bäst med värmebehandling vid både ultraView respektive OptiView DAB. Proteasbehandling gav ospecifik infärgning. Det valda optimala protokollet med SATB2-antikroppsspädning på 1:200, värmebehandling 36 min i ultraView DAB kördes på patientfallen. Resultatet jämfördes med tidigare genomförda IHC-analyser med positivitet för CK20 och CDX2. SATB2 utföll positiv för båda patientfallen, vilket indikera på att protokollet fungerar. Slutsatsen kom blev att optimala protokollet för SATB2 är spädning på 1:200 och värmebehandling 36 min i ultraView DAB. Med detta kan SATB2 införas som ett tillägg till CK20 och CDX2 vid diagnostisering av CRC i rutinverksamheten.