Metodförslag för rening av nativt hemagglutinin från influensavirus

Sammanfattning: Hemagglutinin är ett transmembranprotein som finns i membranet hos influensaviruset. Detta protein avgör virusets infektiösa förmåga. För att förstå influensaviruset bättre och kunna hitta nya detektionsmetoder för aktiva influensavirus krävs en första framrening av proteinet. Målet med denna studie är därför att överlämna ett protokoll till beställaren med fullständig process på hur hemagglutinin kan renas fram från aktiva virus. Resultatet har erhållits genom en omfattande litteraturstudie där information har samlats från skriftliga och elektroniska källor, samt via intervjuer med sakkunniga forskare. Processen att rena fram hemagglutinin börjar med kultivering av virus i cellinjen MDCK följt av virusisolering med hjälp av centrifugering. Virusmembranet löses sedan upp och det membranbundna hemagglutininet solubiliseras. Därefter isoleras hemagglutinin från proteinlösningen med hjälp av anjonbyteskromotografi. För att påvisa närvaron av aktivt hemagglutinin utförs en HA-assay där provet tillförs på röda blodkroppar, varpå agglutination kan observeras. Vi menar de förslagna metoderna utgör en produktionsväg för att rena hemagglutinin från aktiva virus i nativ form. MEtoderna är valda eftersom de har få och enkla steg, vilket gör proceduren säkrare, något som vi lagt stor vikt vid. Alla valda metoder presterar väl med avseende på säkerhet och bör, då de utförs på korrekt sätt enligt alla säkerhetsföreskrifter, inte utsätta handhavaren, allmänheten eller miljön för någon risk.