Expression av PSI-N från Arabidopsis thaliana i E : coli

Sammanfattning: PSI-N is one of the subunits in eukaryotic Photosystem I (PSI) and is located on the lumenal side of the thylakoid membrane. It is known to interact in the electron transport chain between plastocyanin and PSI, but the mechanism behind the interaction is still unclear. To achieve a better understanding of PSI-N´s role in the photosynthesis it is necessary to develop a method for purification of PSI-N. The goal with this project was to design a plasmid that encodes a fusion protein containing PSI-N. With use of proteases the fusion protein can be cleaved into purified PSI-N. The initial material was cDNA, encoding PsaN from Arabidopsis thaliana, this was cloned into a pET32a Xa/LIC vector (from Novagen). The vector was then transformed into a Escherichia coli (E. coli) host. Finally the fusion protein was expressed and successfully isolated. PSI-N är en av subenheterna i Photosystem I (PSI) hos eukaryoter och är lokaliserad på lumensidan av thylakoidmembranet. Det är klargjort att PSI-N på något sätt interagerar i elektron-transportkedjan mellan plastocyanin och PSI, men mekanismen bakom interaktionen är fortfarande okänd. För att förstå på vilket sätt PSI-N medverkar i fotosyntesen krävs en metod för att renframställa PSI-N i större mängd. Målet med det här projektet var att konstruera en plasmid som kodar för ett fusionsprotein innehållande PSI-N. Fusionsproteinet kan sedan klyvas av ett proteas, så att man får fram rent PSI-N. En cDNA kodande för PsaN från Arabidopsis thaliana klonades i vektorn pET32a Xa/LIC (från Novagen), och konstruktionen transformerades in i en Escherichia coli (E. coli) värd. Fusionsproteinet uttrycktes samt isolerades slutligen med lyckat resultat.