Undersökning av en möjlig FNR-beroende promotoruppströms genen för kloritdismutas i Ideonella dechloratans

Sammanfattning: Ideonella dechloratans är en fakultativ anaerob som innehåller generna för kloratreduktas och kloritdismutas nödvändiga för respiration av klorat. Man har tidigare visat att kloritdismutas induceras under anaeroba förhållanden och anses regleras på transkriptionsnivå. Inom sekvensen uppströms genen har ett möjligt FNR-säte lokaliserats, en konsensus-sekvens dit transkriptionsfaktorn FNR kan binda in. FNR är ett regleringsprotein som tillåter anpassning av fakultativa anaerober som Ideonella dechloratans till syrefattiga miljöer. I det här arbete undersöks sekvensen uppströms genen för kloritdismutas efter en möjlig FNR-beroende promotor. Genom tillverkning av två fragment 189 bp respektive 172 bp långt av sekvensen, innehållande en möjlig promotor med och utan -10 elementet och via en plasmidvektor med en β-galaktosidas reportergen transformera in dessa i Escherichia coli och mäta uttrycken med β-galatosidas mätning underaeroba och anaeroba förhållanden. Det 189 bp fragmentet gav upphov till basaluttryck och anaerob induktion på 3.3 x basaluttryck medans 172 bp fragmentet inte gav upphov till något uttryck överhuvudtaget. Fragmenten kotransformerades också in i en FNR-negativ stam tillsammans med en möjlig FNR-gen ifrån Ideonella dechloratans som visade sig ha förmåga att inducera uttrycket av kloritdismutas under anaeroba förhållanden med 2.8 x basaluttrycket. Detta visar att -10 elementetär viktigt för både aerobt och anaerobt uttryck vilket föreslår att det finns en promotor inom 189 bpfragmentet som både står för ett basaluttryck och ett anaerobt uttryck. Resultaten visar också att attden regleras utav FNR och att FNR-genen ifrån Ideonella dechloratans kan utföra den anaeroba induktionen.