Implementering och optimering av orceinmetod för detektion av kopparassocierat protein i levervävnad : en förstudie

Sammanfattning: Gallstas är ett patologiskt tillstånd där antingen produktionen eller flödet av galla är hämmat. Orsaken kan vara mekaniskt stopp och kallas då för extrahepatisk eller annan underliggande kronisk leversjukdom och kallas då för intrahepatisk. Vid gallstas samlas kopparassocierat protein (KAP) i levern. Dessa proteiner kan synliggöras med orcein. Orcein är en histokemisk färg som färgar KAP, och elastiska fibrer. Syftet med arbetet är att utifrån etablerade orceinprotokoll utföra avvikelser för att se hur dessa påverkar orceins förmåga att synliggöra elastiska fibrer. Metoden ska valideras med positivt kontrollmaterial för att på sikt användas inom diagnostik för att påvisa KAP i levervävnad vid avdelningen för Klinisk patologi i Region Kalmar Län. Som kontrollmaterial användes tunntarm och extransplanterad cirrotisk lever. Initialt testades etablerade protokoll och utifrån resultaten gjordes fortsatta tester. Fortsatta tester inkluderade (i) varierande inkubationstider i orcein vid rumstemperatur samt vid 60°C, (ii) varierande koncentration av surgjord kaliumpermanganat samt varierande inkubationstid i orcein i rumstemperatur, (iii) jämförelse mellan orcein från två olika tillverkare (HistoLab och RAL-diagnostic), samt (iv) validering av metod med positivt kontrollmaterial, vid varierande inkubationstid i värme (60°C) och med orcein från annan tillverkare (HistoLab). Resultaten visade att elastiska fibrer och bakgrund färgades mer intensivt vid längre inkubationstid samt att värme minskar bakgrunden i tunntarm. Högre koncentrationer kaliumpermanganat påverkade inte resultatet märkbart förutom vid längre inkubationstid där bakgrunden blev svagare. Stor skillnad upptäcktes mellan olika tillverkare av orcein. Vid infärgning av lever syntes KAP först efter infärgning över natt med RAL-diagnostics orcein och efter enbart 30 minuter med HistoLabs orcein. Bakgrunden i lever är allmänt högre än i tunntarm. Den slutsats som drogs av arbetet är att elastiska fibrer lämpligast synliggörs vid lång inkubationstid i 60°C. KAP synliggörs med båda varianterna av orcein, vidare tester är däremot nödvändigt.