Konstruktion av en mindre variant av plasmiden pQlacZ-1

Sammanfattning:    Syftet med detta projekt var att konstruera en mindre variant av pQlacZ-1 för att senare kunna använda den som reportervektor i Ideonella dechloratans. pQlacZ-1 är en plasmid som är 17,1 kbp stor, som skulle kunna användas som reportervektor i  Ideonella dechloratans för att kunna undersöka olika promotorsekvenser. Detta är möjligt eftersom pQlacZ-1 är en broad host range plasmid och saknar promotorsekvensen för lacZ genen. Ett problem med pQlacZ-1 är dess storlek vilket gör den svår att transformera, och då speciellt i Ideonella dechloratans som är svår att transformera överhuvudtaget. En stor del av projektet har lagts på att ta reda på hur pQlacZ-1 ser ut i detalj, då detta inte finns väl beskrivet. Även efter denna studie saknas information om ett fragment för att få en helt klar bild över hur plasmiden är uppbyggd. Efter att ha ställt upp en hypotes om hur plasmiden ser ut så identifierades ett område som kunde klyvas bort och det var fragmentet med lacA och lacY. Detta gjordes  genom en dubbelklyvning med SalI och BstBI. Den nya mindre varianten av plasmiden har jag valt att kalla pQlacZ-1cc och den ska teoretiskt sett vara ca 13427 bp stor, vilket bör göra den lättare att jobba med. Ytterligare arbete behövs för att verifiera konstruktionen i pQlacZ-1cc.