Optimering av standardprotokoll för immunhistokemisk infärgning av SMARCA4

Sammanfattning: SMARCA4 är en gen som kodar för ett protein vid namn Brahma-related gene 1 (BRG1). BRG1 utgör en väsentlig katalytisk subenhet av SWI/SNF-komplexet, vilket är ett proteinkomplex utvecklat för kromatinremodellering. Att modulera kromatinstrukturen bidrar till att viktiga funktioner, såsom transkription och celldifferentiering, kan utföras. En mutation i SMARCA4-genen kan ge upphov till en lungtumör med benämningen Thoracic SMARCA4-deficient undifferentiated tumor (SMARCA4-UT), vilken kännetecknas av en förlust av uttrycket BRG1 i de maligna cellerna. Då tumören kan variera i morfologiskt utseende och i många fall påminna om andra tumörtyper, kan tillämpning av immunhistokemiska metoder vara till stor hjälp vid den medicinska diagnosticeringen. Syftet med denna studie var att vidareutveckla ett befintligt protokoll för att uppnå en optimal immunhistokemisk infärgning av SMARCA4 (BRG1), för att diagnostiskt kunna differentiera mellan olika lungtumörer. För detta ändamål testades flera olika infärgningsprotokoll och kontrollvävnader, samt två antikroppar av olika kloner från företagen Abcam och Santa Cruz. Infärgning med Abcam-antikroppen (klon EPNCIR111A) uppvisade intensiva och specifika resultat, medan Santa Cruz-antikroppen (klon G-7) gav upphov till negativa infärgningar, trots flera försök till optimering. I samråd med en patolog fastställdes det infärgningsprotokoll som gav bäst resultat, vilket inkluderade en förbehandling bestående av buffert CC1 (64 min, 95° C), antikroppsinkubation med Abcam-antikroppen (32 min, 36° C, spädning 1:100), detektion med ultraView Universal DAB Detection Kit, samt kontrastfärgning med hematoxylin (8 min) och blåning (4 min). Denna immunfärgning kommer att införas som ny metod och användas inom den kliniska verksamheten. Däremot kommer metoden att fortsätta prövas under en tid framöver, för att helt säkerställa dess pålitlighet och kunna valideras inför framtida bruk.